коэкспрессия MYC/BCL2

Экспрессия белков MYC и BCL2 у больных диффузной В-крупноклеточной лимфомой

КЛИНИКА, ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ ЛИМФОИДНЫХ ОПУХОЛЕЙ , , , ,

Мисюрина А.Е. 1, Ковригина А.М.1, Барях Е.А.1, Мисюрин В.А. 2, Кравченко С.К.1,  Куликов С.М.1,  Гемджян Э.Г.1, Обухова Т.Н. 1, Копылов А.Н. 2, Магомедова А.У. 1, Воробьев А.И. 1

1 ФГБУ «Гематологический научный центр» МЗ РФ, Новый Зыковский пр-д., д. 4а, Москва, Российская Федерация, 125167

2 ФГБНУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина», Каширское ш., д. 24, Москва, Российская Федерация, 115478

Для переписки: Анна Евгеньевна Мисюрина, Новый Зыковский пр-д., д. 4а, Москва, Российская Федерация, 125167; тел.: +7(909)637-32-49; e-mail: anna.lukina1@gmail.com

Для цитирования: Мисюрина А.Е., Ковригина А.М., Барях Е.А. и др. Экспрессия белков MYC и BCL2 у больных диффузной В-крупноклеточной лимфомой. Клиническая онкогематология. 2015;8(1):44–53.

РЕФЕРАТ

Цель. Анализ частоты и роли экспрессии белков MYC и BCL2 у больных диффузной В-крупноклеточной лимфомой (ДВКЛ), сопоставление результатов гистологического, иммуногистохимического, генетического и молекулярно-биологического исследований с клиническими характеристиками.

Методы. В исследование включено 62 пациента с подтвержденным диагнозом ДВКЛ, получавших лечение в ФГБУ «Гематологический научный центр» МЗ РФ по оригинальному модифицированному протоколу m-NHL-BFM-90 ± R. Контрольную группу составили 13 больных ДВКЛ, которым лечение проводилось по СНОР-подобным программам ± R. Во всех наблюдениях гистологическое и иммуногистохимическое исследования проводились на архивном материале биопсии фрагмента опухолевой ткани или лимфатического узла (парафиновые блоки) с использованием антител к BCL2 (клон 124, Dako), MYC (клон Y69, Epitomics). На основании алгоритма C.P. Hans (2004) был установлен GCB или non-GCB иммуногистохимический подтип ДВКЛ. В работе проводились стандартные цитогенетические исследования (n = 22), FISH (n = 52) для выявления перестройки локуса гена с-MYC, гена IgH, t(8;14)(q24;q32), гена BCL2, t(14;18)(q32;q21) и количественная ПЦР в реальном времени на парафиновых блоках биоптата опухоли/лимфатического узла с целью определить количество мРНК генов с-MYC и BCL2 (n = 18).

Результаты. Экспрессия MYC выявлена у 24 (39 %) из 62 больных ДВКЛ, BCL2 — у 36 (58 %) из 62 (пороговые значения 40 и 50 % опухолевых клеток соответственно). Коэкспрессия MYC/BCL2 обнаружена у 15 (24 %) из 62 больных ДВКЛ. У 4 (27 %) из 15 пациентов с коэкспрессией MYC/BCL2 установлен GCB-подтип ДВКЛ, у 73 % человек с коэкспрессией указанных выше белков диагностирован non-GCB-подтип ДВКЛ (p < 0,02). Перестройка гена с-MYC установлена у 2 (3 %) больных, у одного из них уровень экспрессии белка MYC составлял более 40 %. У 10 (19 %) пациентов выявлен один или более дополнительный сигнал от локуса 8q24 гена с-MYC. Мы не обнаружили корреляции между наличием дополнительных сигналов от гена с-MYC и уровнем иммуногистохимической экспрессии белка MYC ³ 40 % (p < 0,05). Перестройка гена BCL2 определена в 1 случае, что сопровождалось иммуногистохимической экспрессией BCL2 ³ 50 %. Амплификация BCL2 наблюдалась у 17 (40 %) больных. Выявлена корреляция между амплификацией гена BCL2 и экспрессией белка BCL2 при иммуногистохимическом исследовании (пороговое значение 50 % положительных клеток и более) (p = 0,0053). Наблюдалась прямая связь между количеством мРНК и белка MYC (коэффициент корреляции 0,86; p < 0,0001). Не было обнаружено корреляции между уровнем экспрессии гена BCL2 и количеством белка (коэффициент корреляции составил 0,14; p = 0,57). Общая 4-летняя выживаемость в группе больных, которым проводилось лечение по протоколу m-NHL-BFM-90 ± R, без коэкспрессии MYC и BCL2 составила 71 vs 57 % в группе c коэкспрессией MYC/BCL2 (p = 0,39). Вероятность развития рецидивов/прогрессирования у больных ДВКЛ c коэкспрессией MYC/BCL2 статистически значимо выше, чем в группе без коэкспрессии (65 vs 15 %; p = 0,0029).

Выводы. Коэкспрессия MYC/BCL2 встречается преимущественно у пациентов с ДВКЛ иммуногистохимического подтипа non-GCB. У больных ДВКЛ, получающих интенсивную химиотерапию по протоколу m-NHL-BFM-90 ± R, коэкспрессия MYC/BCL2 имеет прогностическое значение в отношении риска развития рецидивов/прогрессирования заболевания. Учитывая более стабильную структуру белкового субстрата, полученные в работе данные могут служить основанием для разработки диагностического иммуногистохимического алгоритма стратификации пациентов с ДВКЛ.

Ключевые слова: ДВКЛ, интенсивная терапия, коэкспрессия MYC/BCL2, иммуногистохимия, фактор неблагоприятного прогноза.

Получено: 8 ноября 2014 г.

Принято в печать: 11 ноября 2014 г.

Читать статью в PDFpdficon

ЛИТЕРАТУРА

  1. Swerdlow SH, Campo E, Harris NL, et al, eds. WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. 4th edition. Lyon: IARC Press; 2008.
  2. A predictive model for aggressive non-Hodgkin’s lymphoma. The International Non-Hodgkin’s Lymphoma Prognostic Factors Project. N Engl J Med. 1993;329(14):987–94.
  3. Frick M, Dorken B, Lenz G. New insights into the biology of molecular subtypes of diffuse large B-cell lymphoma and Burkitt lymphoma. Best Pract Res Clin Haematol. 2012;25(1):3–12. doi: 10.1016/j.beha.2012.01.003.
  4. Alizadeh AA, Eisen MB, Davis RE, et al. Distinct types of diffuse large B-cell lymphoma identified by gene expression profiling. Nature. 2000;403(6769):503–11. doi: 10.1038/35000501.
  5. Rosenwald A, Wright G, Chan WC, et al. The use of molecular profiling to predict survival after chemotherapy for diffuse large-B-cell lymphoma. N Engl J Med. 2002;346(25):1937–47. doi: 10.1056/nejmoa012914.
  6. Shipp MA, Ross KN, Tamayo P, et al. Diffuse large B-cell lymphoma outcome prediction by gene-expression profiling and supervised machine learning. Nat Med. 2002;8(1):68–74. doi: 10.1038/nm0102-68.
  7. Lenz G, Wright G, Dave SS, et al. Stromal gene signatures in large-B-cell lymphomas. N Engl J Med. 2008;359(22):2313–23. doi: 10.1056/nejmoa0802885.
  8. Rosenwald A, Wright G, Leroy K, et al. Molecular diagnosis of primary mediastinal B cell lymphoma identifies a clinically favorable subgroup of diffuse large B cell lymphoma related to Hodgkin lymphoma. J Exp Med. 2003;198(6):851–62. doi: 10.1084/jem.20031074.
  9. Savage KJ, Monti S, Kutok JL, et al. The molecular signature of mediastinal large B-cell lymphoma differs from that of other diffuse large B-cell lymphomas and shares features with classical Hodgkin lymphoma. Blood. 2003;102(12):3871–9. doi: 10.1007/s00795-013-0038-8.
  10. Wright G, Tan B, Rosenwald A, et al. A gene expression-based method to diagnose clinically distinct subgroups of diffuse large B cell lymphoma. Proc Natl Acad Sci USA. 2003;100(17):9991–6. doi: 10.1073/pnas.1732008100.
  11. Мисюрина А.Е., Мисюрин В.А., Барях Е.А и др. Роль экспрессии c-MYC, BCL-2, BCL-6 в патогенезе диффузной В-крупноклеточной лимфомы. Клиническая онкогематология. 2014;7(4):512–21.
    [Misyurina AE, Misyurin VA, Baryakh EA, et al. Role of c-MYC, BCL-2, and BCL-6 expression in pathogenesis of diffuse large B-cell lymphoma. Klinicheskaya onkogematologiya. 2014;7(4):512–21. (In Russ)]
  12. Savage KJ, Johnson NA, Ben-Neriah S, et al. MYC gene rearrangements are associated with a poor prognosis in diffuse large B-cell lymphoma patients treated with R-CHOP chemotherapy. Blood. 2009;114(17):3533–7. doi: 10.1182/blood-2009-05-220095.
  13. Horn H, Ziepert M, Becher C, et al. MYC status in concert with BCL2 and BCL6 expression predicts outcome in diffuse large B-cell lymphoma. Blood. 2013;121(12):2253–63. doi: 10.1182/blood-2012-06-435842.
  14. Barrans S, Crouch S, Smith A, et al. Rearrangement of MYC is associated with poor prognosis in patients with diffuse large B-cell lymphoma treated in the era of rituximab. J Clin Oncol. 2010;28(20):3360–5. doi: 10.1200/jco.2009.26.3947.
  15. Iqbal J, Sanger WG, Horsman DE, et al. BCL2 translocation defines a unique tumor subset within the germinal center B-cell-like diffuse large B-cell lymphoma. Am J Pathol. 2004;165(1):159–66. doi: 10.1016/s0002-9440(10)63284-1.
  16. Ohno H, Fukuhara S. Significance of rearrangement of the BCL6 gene in B-cell lymphoid neoplasms. Leuk Lymphoma. 1997;27(1–2):53–63. doi: 10.3109/10428199709068271.
  17. Willis TG, Dyer MJ. The role of immunoglobulin translocations in the pathogenesis of B-cell malignancies. Blood. 2000;96(3):808–22.
  18. Hu S, Xu-Monette ZY, Tzankov A, et al. MYC/BCL2 protein co-expression contributes to the inferior survival of activated B-cell subtype of diffuse large B-cell lymphoma and demonstrates high-risk gene expression signatures: a report from The International DLBCL Rituximab-CHOP Consortium Program Study. Blood. 2013;121(20):4021–31. doi: 10.1182/blood-2012-10-460063.
  19. Green TM, Young KH, Visco C, et al. Immunohistochemical Double-Hit Score Is a Strong Predictor of Outcome in Patients With Diffuse Large B-Cell Lymphoma Treated With Rituximab Plus Cyclophosphamide, Doxorubicin, Vincristine, and Prednisone. J Clin Oncol. 2012;30(28):3460–7. doi: 10.1200/jco.2011.41.4342.
  20. Johnson NA, Slack GW, Savage K, et al. Concurrent Expression of MYC and BCL2 in Diffuse Large B-Cell Lymphoma Treated With Rituximab Plus Cyclophosphamide, Doxorubicin, Vincristine, and Prednisone. J Clin Oncol. 2012;30(28):3452–9. doi: 10.1200/jco.2011.41.0985.
  21. Valera A, Lopez-Guillermo A, Cardesa-Salzmann T. MYC protein expression and genetic alterations have prognostic impact in patients with diffuse large B-cell lymphoma treated with immunochemotherapy. Haematologica. 2013;98(10):1554–62. doi: 10.3324/haematol.2013.086173.
  22. Магомедова А.У., Кравченко С.К., Кременецкая AM. и др. Модифицированная программа NHL-BFM-90 в лечении больных диффузной В-крупноклеточной лимфосаркомой. Терапевтический архив. 2006;10:44–7.
    [Magomedova AU, Kravchenko SK, Kremenetskaya AM, et al. Modified NHL-BFM-90 protocol in treatment of diffuse large B-cell lymphosarcoma. Terapevticheskii arkhiv. 2006;10:44–7. (In Russ)]
  23. Hans CP, Weisenburger DD, Greiner TC, Gascoyne RD. Confirmation of the molecular classification of diffuse large B-cell lymphoma by immunohistochemistry using a tissue microarray. Blood. 2004;103(1):275–82. doi: 10.1182/blood-2003-05-1545.
  24. Green TM, Nielsen O, de Stricker K, et al. High levels of nuclear MYC protein predict the presence of MYC rearrangement in diffuse large B-cell lymphoma. Am J Surg Pathol. 2012;36(4):612–9. doi: 10.1097/pas.0b013e318244e2ba.
  25. Cook JR, Goldman B, Tubbs RR. Clinical significance of MYC expression and/or “high-grade” morphology in non-Burkitt, diffuse aggressive B-cell lymphomas: a SWOG S9704 correlative study. Am J Surg Pathol. 2014;38(4):494–501. doi: 10.1097/PAS.0000000000000147.
  26. Leucci E, Cocco M, Onnis A, et al. MYC translocation-negative classical Burkitt lymphoma cases: an alternative pathogenetic mechanism involving miRNA deregulation. J Pathol. 2008;216(4):440–50. doi: 10.1002/path.2410.
  27. Onnis A, De Falco G, Antonicelli G, et al. Аlteration of microRNAs regulated by c-MYC in Burkitt lymphoma. PLoS One. 2010;5(9);e12960. doi: 10.1371/journal.pone.0012960.
  28. Kluin PM. Origin And Migration of Follicular Lymphoma Cells. Haematologica. 2013;98(9):1331–3. doi: 10.3324/haematol.2013.091546.
  29. Ameres SL, Zamore PD. Diversifying microRNA sequence and function. Nat Rev Mol Cell Biol. 2013;14(8):475–88. doi: 10.1038/nrm3611.
  30. Мангасарова Я.К., Мисюрин А.В., Магомедова А.У. и др. Молекулярная диагностика первичной медиастинальной В-клеточной лимфомы и диффузной В-крупноклеточной лимфомы с первичным вовлечением лимфоузлов средостения. Клиническая онкогематология. 2011;4(2):142–5.
    [Mangasarova YaK, Misyurin AV, Magomedova AU, et al. Molecular diagnostics of primary mediastinal B-cell lymphoma and diffuse large B-cell lymphoma with primary involvement of mediastinal lymph nodes. Klinicheskaya onkogematologiya. 2011;4(2):142–5. (In Russ)]
  31. Liu Y, Hernandez AM, Shibata D, Cortopassi GA. BCL2 translocation frequency rises with age in humans. Proc Natl Acad Sci USA. 1994;91(19):8910–4. doi: 10.1073/pnas.91.19.8910.
  32. Harries LW, Hernandez D, Henley W. Human aging is characterized by focused changes in gene expression and deregulation of alternative splicing. Aging Cell. 2011;10(5):868–78. doi: 10.1111/j.1474-9726.2011.00726.x.
  33. Dunleavy K, Pittaluga S, Shovlin M. Concurrent Expression Of MYC/BCL2 Protein In Newly Diagnosed DLBCL Is Not Associated With An Inferior Survival Following EPOCH-R Therapy. Blood. 2013;122(21):3029.